IV tüüpi gripiviiruse kana embrüo kogumise puljongi allavoolu puhastamisprotsessi optimeerimisuuring ( 2. osa )
Sep 23, 2026| Erinevate ultrafiltratsiooni kontsentreerimisprotsesside mõju IV tüüpi gripiviiruse puhastatud vedeliku kvaliteedile
Gripiviiruse kontsentraadil on suur maht, madal hemaglutiniinisisaldus ning kõrge lisandite ja valkude sisaldus, mistõttu on enne järgnevat töötlemist vaja ultrafiltrimise kontsentreerimist. Ultrafiltreerimine on eelistatud meetod kerge ja suuremahulise tootmise kontsentreerimiseks. Uuringud on näidanud, et 750 kd õõneskiu süsteem võib märkimisväärselt vähendada kontsentraadi ovalbumiini sisaldust, samas kui teine uuring näitab, et 1000 kd membraani kapseldamise süsteem võib märkimisväärselt vähendada linnugripi kontsentraadi lisandeid ja valke. Pärast ulatusliku kirjanduse läbivaatamist ja kahe üldkasutatava ultrafiltratsiooni kontsentreerimisseadme, 750 kd õõneskiu süsteemi ja 1000 kd membraankapseldamise süsteemi, võrdlemist, mille kõik tingimused, välja arvatud operatsioonisüsteem, olid identsed, määrati katsetulemuste põhjal optimaalne ultrafiltrimise kontsentratsiooniprotsess.
Testi tulemused on näidatud joonisel 4-9. UA1-1 tähistab kolme ultrafiltratsioonikontsentraadi partii keskmist, mis on filtreeritud 750 kd õõneskiu süsteemiga, UA1-2 tähistab kolme ultrafiltratsioonikontsentraadi partii keskmist, mis on filtreeritud 1000 kd membraansüsteemiga jne.
Joonis 4. Gripiviiruse kontsentraadi - üldvalgusisalduse tuvastamise tulemused
Joonis 5. Gripiviiruse kontsentraadi - ovalbumiinisisalduse tuvastamise tulemused
Joonis 6. Gripiviiruse kontsentraadi - üldvalgu eemaldamise kiiruse tuvastamise tulemused
Joonis 7. Gripiviiruse kontsentraadi - hemaglutinatsioonitiitri tuvastamise tulemused
Joonis 8. Gripiviiruse kontsentraadi - kontsentratsiooni tiitri saagise tuvastamise tulemused
Joonis 9. Gripiviiruse kontsentraadi - hemaglutiniini sisalduse tuvastamise tulemused
Tulemused näitasid, et kõigis gripiviiruse kontsentraadi rühmades oli bakteriaalsete endotoksiinide tase alla 60 EU/ml. Statistiliselt olulisi erinevusi ovalbumiinisisalduses, hemaglutinatsioonitiitris, hemaglutiniinisisalduses ja kontsentratsiooni tiitri saagises ei ilmnenud, mis võib olla seotud gripiviiruse struktuuriga. 1000 kDa membraansüsteemiga töötlemine näitas aga gripi V ja BY tüvede koguvalgusisalduse vähenemist, samuti gripi H3N2 ja BY tüvede valgu kogueemalduskiiruse vähenemist. Lisaks kulus 1000 kDa membraanisüsteemil sama koguse selgitatud lahuse kontsentreerimiseks vähem aega, mis näitab eelist ajakulu osas. Seetõttu valiti V gripiviiruse tüvede gripiviiruse kontsentraadi ultrafiltrimise kontsentratsiooniks 1000 kDa membraanisüsteem.
Erinevate kontsentratsioonisuhete mõju IV tüüpi gripiviiruse selitatud lahuse kvaliteedile
Kontsentratsioonitegur on puhastamise oluline etapp, mis on tihedalt seotud sihtvalgu saagise, kontsentreerimisajaga ja kontsentreerimissüsteemi ohutusega. Ultrafiltratsiooni kontsentratsiooniuuringuteks valiti 1000 kd membraani kapseldamissüsteem . 60 Igast neljast gripiviiruse tüübist (UA1, UA3, UB1 ja UB2) koguti liitrit allantoisivedelikku ning allutati pidevale voolutsentrifuugimisele ja mitmeastmelisele selgitamisele, et saada igast selitatud lahusest 54 liitrit lahust. Iga selitatud lahus jagati üheksaks rühmaks, millest igaüks oli 6 liitrit, ja uuriti kontsentratsioonifaktoreid 30, 40 ja 50, kusjuures iga faktorit korrati kolm korda, et kontrollida korratavust ja stabiilsust. Vastavad lõppmahud olid vastavalt 0,2 L, 0,15 L ja 0,12 L.
, võeti proovid, et testida valgu üldsisaldust, kogu valgu eemaldamise kiirust, hemaglutinatsiooni tiitrit, kontsentratsiooni tiitri saagist ja hemaglutiniini sisaldust. Testi tulemused on näidatud joonisel 10-14 .
Joonis 1.0 Gripiviiruse serotüübi 4 selitatud lahuse kontsentratsiooni tulemused erinevatel kontsentratsioonisuhetel - üldvalgusisaldus
Joonis 1.1 IV tüüpi gripiviiruse selitatud lahuse kontsentratsiooni tulemused pärast erinevaid kontsentratsioonisuhteid - üldvalgu eemaldamise kiirus
Joonis 12. Gripiviiruse serotüüp IV selitatud vedeliku tuvastamise tulemused pärast kontsentreerimist erinevatel kontsentratsioonisuhetel - hemaglutinatsioonitiiter
Joonis 1.3 Erinevat tüüpi gripiviiruse selitatud lahuse kontsentratsiooni tulemused pärast erinevaid kontsentratsioonisuhteid - kontsentratsiooni tiiter ja saagis
Joonis 14. Hemaglutiniini sisalduse määramise tulemused IV tüüpi gripiviiruse selitatud lahuses pärast kontsentreerimist erinevatel kontsentratsioonisuhetel.
Tulemused näitasid, et erinevate kontsentratsioonisuhete korral näitasid madalamad kontsentratsioonisuhted madalamat valgu kogusisaldust ja koguvalgu eemaldamise kiirust, samuti madalamat hemaglutinatsiooni tiitrit, kontsentratsiooni tiitri saagist ja hemaglutiniini sisaldust. Kõrgemad kontsentratsioonisuhted võivad neid probleeme vältida, kuid need seadsid süsteemile kõrgemad nõudmised, suurendasid süsteemi töörõhku ja suurendasid potentsiaalselt kadusid. Lisaks viis suurenenud surve pikemaks tootmisajaks, suurendades seega ajakulusid. Kõiki tegureid arvestades oli optimaalne kontsentratsiooni suhe 30-40 korda.
Erinevate puhastusprotsesside mõju IV tüüpi kontsentreeritud gripiviiruse kvaliteedile
Tulemused näitasid, et Capto Core 700 puhastamine andis kõrgema üldvalgu ja ovalbumiini eemaldamise määra ning madalama valgu ja ovalbumiini üldsisalduse, kuid madalama hemaglutiniinisisalduse ja saagise. Sahharoosi tiheduse gradiendi tsentrifuugimine seevastu saavutas kõrgema hemaglutiniini sisalduse ja saagise . Lisaks oli Capto Core 700 hemaglutiniini saagis pidevalt üle 50%, veidi madalam kui sahharoosi tiheduse gradiendi tsentrifuugimisel. Arvestades aga, et sahharoosi tiheduse gradiendiga tsentrifuugimine nõuab pärast puhastamist desahhariseerimist, on aeganõudvam- ja põhjustab suuremaid kadusid, on Capto Core 700 eelistatud meetod. Puhastusmeetod Core 700 on IV tüüpi kontsentreeritud gripiviiruse puhastusmeetodina parem.
Viited: Huang, Zhentian. Neljavalentse gripiviiruse jagatud vaktsiini tootmisprotsessi optimeerimine [D]. Shenyangi Põllumajandusülikool, 2024. DOI:10.27327/d.cnki.gshnu.2024.001595.